湖州申科生物參考USP通則<1132.1>闡述的內(nèi)容，依托公司深耕生物制品質(zhì)量控制領(lǐng)域十余年經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)LC-MS檢測(cè)HCPs方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)與優(yōu)化。同時(shí)通過(guò)對(duì)LC-MS檢測(cè)HCPs整體流程建立完整的質(zhì)控，建立起一套抗干擾能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果真實(shí)可靠的LC-MS檢測(cè)HCPs標(biāo)準(zhǔn)方法。檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)分成樣品制備、質(zhì)譜檢測(cè)、數(shù)據(jù)生信分析及質(zhì)譜結(jié)果方法驗(yàn)證四部分，已使用LC-MS平臺(tái)進(jìn)行了293T、不同工藝E.coli、CHO、Vero、MDCK、Sf9等不同工程細(xì)胞HCPs抗體覆蓋率的檢測(cè)分析。

昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（IC-BEVS）是以桿狀病毒作為外源基因載體，以昆蟲細(xì)胞作為宿主進(jìn)行外源蛋白生產(chǎn)的真核表達(dá)系統(tǒng)。BVES具有易于規(guī)?；a(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)陸續(xù)被研究用于生產(chǎn)重組蛋白、rAAV載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等， 在生物制品重組蛋白表達(dá)領(lǐng)域已有普遍運(yùn)用。Sf9來(lái)源于草地夜蛾細(xì)胞系（Spodoptera frugiperda cell line，Sf），是目前較常用的昆蟲細(xì)胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP殘留蛋白檢測(cè)試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可定量檢測(cè)使用Sf9細(xì)胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細(xì)胞蛋白的殘留檢測(cè)。試劑盒抗體覆蓋率為70.4%-96.0%（IMBS-2D）和91.2% (IMBS-MS，Unique Peptide ≥2）。

宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）檢測(cè)是生物制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，采用基于抗體的免疫學(xué)方法（如ELISA）。然而，不同試劑盒之間的檢測(cè)結(jié)果常存在明顯差異，關(guān)鍵原因在于其依賴的關(guān)鍵組分——HCP校準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體——本身制備與表征的高度可變性。校準(zhǔn)品作為定量的基準(zhǔn)，其復(fù)雜性極大。不同供應(yīng)商在制備時(shí)使用的細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)及表達(dá)條件、宿主蛋白提取純化工藝（例如目標(biāo)產(chǎn)物去除策略）差異明顯，導(dǎo)致校準(zhǔn)品的組成、代表性及穩(wěn)定性各不相同。同樣，檢測(cè)抗體（尤其是多抗）通過(guò)免疫動(dòng)物獲得，其特異性與覆蓋度受免疫原、動(dòng)物應(yīng)答個(gè)體差異、免疫方案及后續(xù)抗體篩選/純化過(guò)程的影響巨大，不同批次或來(lái)源抗體的識(shí)別譜（如對(duì)不同HCP的親和力、對(duì)低豐度蛋白的靈敏度）存在本質(zhì)差別。正是這些關(guān)鍵組分固有的明顯變異度，導(dǎo)致不同試劑盒對(duì)同一樣本的檢測(cè)結(jié)果在數(shù)值上、甚至特定HCP的檢出能力上可能出現(xiàn)較大偏差。因此，為確保檢測(cè)結(jié)果真實(shí)反映自身產(chǎn)品的HCP殘留情況，企業(yè)應(yīng)結(jié)合自身產(chǎn)品特性和工藝，對(duì)不同試劑盒進(jìn)行詳細(xì)的平行比對(duì)與適用性評(píng)估，以篩選出匹配度較高的檢測(cè)方案。

大腸桿菌具有遺傳性狀清晰，易于培養(yǎng)和控制，表達(dá)水平高，成本低，周期短等特點(diǎn)，是優(yōu)先的經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，K-12系列和B系列菌株是工業(yè)規(guī)模上常用于生物工程的E.coli細(xì)菌株。K-12菌種、所衍生出的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大量生產(chǎn)質(zhì)粒DNA并進(jìn)一步制備細(xì)胞基因治療產(chǎn)品和病毒載體類疫苗。源于B系的菌株，如BL21，更適用于高效轉(zhuǎn)染表達(dá)載體和常規(guī)蛋白的表達(dá)，如：病毒蛋白、重組蛋白疫苗、細(xì)胞因子、酶類等產(chǎn)品。湖州申科生物針對(duì)這兩種菌株的特點(diǎn)，分別開發(fā)了E.coli表達(dá)菌HCP殘留檢測(cè)試劑盒和E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測(cè)試劑盒。

湖州申科生物通過(guò)自主可控的供應(yīng)鏈體系與嚴(yán)格驗(yàn)證的技術(shù)性能，確保HCP檢測(cè)試劑盒的長(zhǎng)期穩(wěn)定供應(yīng)與優(yōu)異的分析能力。一方面，公司實(shí)現(xiàn)了關(guān)鍵物料的自研自產(chǎn)：校準(zhǔn)品采用凍干工藝大規(guī)模制備，可穩(wěn)定保存10年以上；抗體通過(guò)大動(dòng)物免疫獲得，產(chǎn)量可滿足≥10,000盒試劑盒的生產(chǎn)需求，保障同批次抗體持續(xù)供應(yīng)超過(guò)10年；試劑盒經(jīng)多批次驗(yàn)證顯示良好的批內(nèi)與批間一致性。另一方面，所有產(chǎn)品參考ICH Q2（R2）和ICH M10法規(guī)要求完成驗(yàn)證：以E.coli HCP產(chǎn)品為例，其線性范圍（243-1 ng/mL）的R2>0.999，各濃度點(diǎn)回收率偏差≤5%；準(zhǔn)確度達(dá)81.2%-111.6%，中間精密度CV值5.7%-12.4%；LLOQ低至1.5 ng/mL，且對(duì)多種宿主細(xì)胞（如CHO、HEK293等）的交叉反應(yīng)均低于檢測(cè)限。同時(shí)，通過(guò)二維電泳（檢出826個(gè)蛋白點(diǎn)）與質(zhì)譜法（鑒定2204個(gè)蛋白點(diǎn)）雙重表征校準(zhǔn)品，并采用IMBS-2D（>70%）與IMBS-MS（84.7%）正交技術(shù)驗(yàn)證抗體覆蓋率，從源頭確保檢測(cè)結(jié)果的全面性與可靠性。

湖州申科生物推出的宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測(cè)全自動(dòng) ELISA 分析系統(tǒng)，整合了標(biāo)曲制備、樣本加樣、恒溫孵育、板孔清洗及結(jié)果檢測(cè)等全流程功能。系統(tǒng)搭載的高精度前處理模塊與檢測(cè)模塊，通準(zhǔn)確控制實(shí)驗(yàn)參數(shù)，有效減少人為操作誤差，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性。其多模塊單獨(dú)運(yùn)行設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)不同檢測(cè)任務(wù)的并行處理，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期，明顯提升整體實(shí)驗(yàn)效率。在保障結(jié)果可靠的基礎(chǔ)上，該系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了 ELISA 實(shí)驗(yàn)的自動(dòng)化操作、標(biāo)準(zhǔn)化流程與快速化輸出，降低了對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技能要求，同時(shí)通過(guò)優(yōu)化資源配置減少檢測(cè)成本。此外，系統(tǒng)內(nèi)置完善的數(shù)據(jù)管理功能，可滿足實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)完整性記錄與全流程審計(jì)追蹤需求，嚴(yán)格符合 21 CFR Part 11 法規(guī)要求，并配備三級(jí)權(quán)限管理機(jī)制，進(jìn)一步保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的安全性與規(guī)范性。