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江蘇單抗藥物用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

來源： 發(fā)布時間：2025-09-01

湖州申科采用免疫磁珠分離（IMBS）結(jié)合 2D 電泳或者 LC-MS 的方法評估抗體覆蓋率。IMBS主要流程包括多克隆抗體與磁珠偶聯(lián)，磁珠未結(jié)合位點的封閉，HCP樣本與結(jié)合抗體的磁珠共同孵育，此過程中 HCP 抗體結(jié)合可以識別的 HCP，而未識別的 HCP 則通過后續(xù)洗滌步驟去除，再通過低 pH等洗脫條件收集抗體捕獲的HCP。該方法擁有 AAE(Antibody Affinity Extraction)免疫層析柱分離的所有優(yōu)點，同時免疫磁珠可以在懸浮的條件下與 HCP樣品充分混勻結(jié)合，HCP結(jié)合效果更佳，由于采用磁珠吸附可以減少 HCP與填料的非特異性吸附，提高實驗準確性。
總蛋白檢測差異是 HCP 免疫檢測結(jié)果不同的原因之一。江蘇單抗藥物用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

江蘇單抗藥物用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

按照美國藥典1132章節(jié)的要求，HCPs校準品需滿足代表性要求，即能覆蓋實際工藝產(chǎn)品生產(chǎn)中的HCPs。從HCP免疫檢測方法使用目的和預期風險管理要求考慮，滿足工藝開發(fā)和驗證，同時為了應對下游工藝中潛在的異常工藝失效，或工藝變更需求，建議采用上游發(fā)酵工藝末端，如澄清處理后工藝點的樣本作為HCPs的來源。在實際制備中，可采用空細胞或空載細胞在模擬實際工藝的預定條件進行采集，通過二維電泳或高分辨率質(zhì)譜等蛋白質(zhì)組學方法進行模擬工藝和實際工藝下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白種類越少，也越接近DS中HCPs，但是其可能無法滿足工藝開發(fā)和驗證需求，也無法保證工藝的潛在風險，往往不推薦使用，或只作為上游工藝HCPs免疫檢測法的輔助使用。
廣東通用型宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體覆蓋率驗證HCP檢測方法驗證需評估線性范圍、中間精密度、靈敏度等關鍵參數(shù)。

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美國藥典<1132>章節(jié) 和歐洲藥典<2.6.34>章節(jié)建議對于即將進入商業(yè)化生產(chǎn)的（臨床III期及以后）或生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的生物制品采用定制化ELISA試劑盒進行宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測，原因可能是：①確保檢測方法可以充分覆蓋實際工藝產(chǎn)生的HCPs，避免漏檢關鍵雜質(zhì)；②支持更準確的免疫原性和安全性評估；③提供真實的工藝表征數(shù)據(jù)，而非推測數(shù)據(jù)；④滿足商業(yè)化生產(chǎn)質(zhì)量控制的方法一致性。此外，對目前市場上常見的HCP ELISA商業(yè)化試劑盒進行了測試，并與HCP ELISA定制化試劑盒進行對比，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同商業(yè)化試劑盒檢測同一樣品的檢測值差異大，且準確性均低于定制化試劑盒，表明定制化試劑盒更能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制所需。

為什么定制化試劑盒是宿主細胞蛋白殘留檢測的優(yōu)先選擇？原因之一是建立定制化檢測體系，更滿足商業(yè)化生產(chǎn)HCP工藝雜質(zhì)控制要求。在HCP校準品和HCP抗體兩大關鍵試劑組分滿足要求的前提下，定制化方法的建立和優(yōu)化是基于真實純化中間品和原液樣品進行，通過優(yōu)化檢測條件，提高對低濃度HCPs的檢測靈敏度，滿足工藝驗證和過程控制要求。在臨床三期，生產(chǎn)工藝需要進行系統(tǒng)驗證，以確保其穩(wěn)定性和可重復性。定制化HCP ELISA檢測方法能夠更準確地監(jiān)測生產(chǎn)工藝中HCP的去除效果，為工藝驗證提供有力支持。在過程控制中，通過工藝特異型的HCP ELISA檢測方法，可以實時監(jiān)測生產(chǎn)過程中的HCP水平，具備更強的生產(chǎn)異常預警能力，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)風險，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
通用型試劑盒為市售廣譜方案，使用前需嚴格評估抗體對特定 HCP 的覆蓋率。

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宿主細胞蛋白（HCPs）是生物制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的關鍵工藝相關雜質(zhì)之一，可導致患者不良的免疫反應、超敏反應，另外也存在導致產(chǎn)品蛋白的降解等問題，影響產(chǎn)品的安全性和有效性，是一項關鍵質(zhì)控指標。HCPs殘留檢測應用常用的方法是ELISA法，操作簡單、靈敏度高，通量較高，是HCPs殘留檢測的日常放行檢方法，各國藥典規(guī)定了用酶聯(lián)免疫法進行HCPs殘留檢測。然而，ELISA 方法檢測HCP殘留仍面臨諸多挑戰(zhàn)。在實際的工藝生產(chǎn)過程中，宿主來源、生產(chǎn)工藝、純化方式、生產(chǎn)規(guī)模等因素均可能對HCPs的種類及復雜性產(chǎn)生影響。
平臺型試劑盒適用于相近工藝產(chǎn)品線，可適用監(jiān)測不同產(chǎn)品 HCP 水平。浙江細胞基因治療產(chǎn)品用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測橋接驗證

宿主檢測方法替換需橋接驗證，確保新舊方法結(jié)果一致性與可比性。江蘇單抗藥物用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測方法對比

各國法規(guī)要求必須對生物藥品進行分析和純化，以將宿主細胞蛋白HCP降低到可接受的水平；即使終產(chǎn)品中痕量的宿主細胞蛋白HCP到達患者體內(nèi)，尚不清楚特定的殘留蛋白質(zhì)雜質(zhì)是否會影響藥物的穩(wěn)定性或免疫原性。關于HCP的限量標準，美國藥典推薦值為終產(chǎn)品的HCP水平1-100 ng/mg；中國藥典各論中E.coli菌體HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.10% (1000 ng/mg)，CHO細胞HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.05% (500 ng/mg)，假單胞菌HCP應不高于蛋白質(zhì)總量的0.02% (200 ng/mg)。
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