MDCK（Madin-Darby Canine Kidney，馬丁達(dá)比犬腎上皮細(xì)胞）細(xì)胞系是一種來源于犬腎的長久性細(xì)胞系，其被普遍用作流感病毒增殖與純化、流感疫苗生產(chǎn)等過程中的細(xì)胞基質(zhì)?；谄湟赘行?、高產(chǎn)高滴度、無適應(yīng)性突變、易馴化等優(yōu)勢，MDCK細(xì)胞成為公認(rèn)的適合于流感病毒毒株分離和流感疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞系。與其他產(chǎn)品雜質(zhì)一樣，MDCK宿主殘留蛋白（HCP）可能對生物制品的安全性和有效性產(chǎn)生不利影響，因此在生產(chǎn)監(jiān)測、產(chǎn)品放行等過程中需要對其進行定量研究并進行嚴(yán)格控制。SHENTEK^® MDCK HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）是湖州申科生物自主研發(fā)的、具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的、實現(xiàn)關(guān)鍵試劑全國產(chǎn)化的MDCK HCP通用檢測試劑盒。本試劑盒適用于基于MDCK細(xì)胞基質(zhì)的病毒增殖及純化、疫苗生產(chǎn)等過程中MDCK宿主殘留蛋白的定量檢測。本試劑盒操作步驟少，快速，檢測專一性強，性能穩(wěn)定可靠。

湖州申科生物依托高分辨質(zhì)譜技術(shù)推出宿主細(xì)胞蛋白定制化檢測服務(wù)組合，覆蓋生物制品殘留蛋白分析需求。該平臺提供四類服務(wù)：HCP蛋白檢測定制化服務(wù)；通過ELISA、雙向電泳（2D）及LC-MS/MS技術(shù)，支持常規(guī)生物制品檢測、高危及工藝相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)庫構(gòu)建以及特殊生物制品分析；抗體覆蓋率服務(wù)采用自主研發(fā)的IMBS技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜，準(zhǔn)確評估ELISA試劑盒對工程細(xì)胞HCP的捕獲能力，并完成校準(zhǔn)品表征；靶向HCP檢測專注于高風(fēng)險殘留蛋白的方法開發(fā)；同時提供蛋白種屬鑒定服務(wù)，利用LC-MS技術(shù)溯源樣品中的物種特異性肽段。該服務(wù)體系通過多技術(shù)聯(lián)用與深度定制化策略，滿足從基礎(chǔ)篩查到工藝關(guān)鍵雜質(zhì)監(jiān)控的全維度需求。

宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）是生物制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的關(guān)鍵工藝相關(guān)雜質(zhì)之一，可導(dǎo)致患者不良的免疫反應(yīng)、超敏反應(yīng)，另外也存在導(dǎo)致產(chǎn)品蛋白的降解等問題，影響產(chǎn)品的安全性和有效性，是一項關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo)。HCPs殘留檢測應(yīng)用常用的方法是ELISA法，操作簡單、靈敏度高，通量較高，是HCPs殘留檢測的日常放行檢方法，各國藥典規(guī)定了用酶聯(lián)免疫法進行HCPs殘留檢測。然而，ELISA 方法檢測HCP殘留仍面臨諸多挑戰(zhàn)。在實際的工藝生產(chǎn)過程中，宿主來源、生產(chǎn)工藝、純化方式、生產(chǎn)規(guī)模等因素均可能對HCPs的種類及復(fù)雜性產(chǎn)生影響。

宿主細(xì)胞蛋白殘留檢測抗體覆蓋率評估實驗操作復(fù)雜，需要在建立實驗方法階段對關(guān)鍵步驟進行充分的驗證，以證明實驗方法的穩(wěn)健性。湖州申科開發(fā)的基于磁珠捕獲的IMBS方法（immunomagnetic beads separation），在開發(fā)過程中對關(guān)鍵步驟進行了充分驗證,相關(guān)結(jié)果經(jīng)過專業(yè)評審，驗證的內(nèi)容如下（部分）：①方法優(yōu)化：針對磁珠與抗體的偶聯(lián)比例、洗滌液體積、洗滌次數(shù)、洗脫次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)進行優(yōu)化驗證，以保證方法的穩(wěn)健性；②過程質(zhì)控：二維電泳存在實驗步驟多，時間跨度長，中間步驟難以控制等缺陷，因此在等電聚焦實驗部分設(shè)計了熒光標(biāo)記多肽，可快速判斷等電聚焦效果。在SDS-PAGE電泳的兩側(cè)增加40 ng銀染質(zhì)控，用于銀染顯色的控制；③方法重復(fù)性：針對2D分析以及LC-MS分析進行重復(fù)性確認(rèn)，其中2D分析方法重復(fù)性可達(dá)到80%以上，LC-MS分析方法可到90%以上；④上樣量優(yōu)化：針對2D分析以及LC-MS分析進行上樣量確認(rèn)，消除上樣量差異對檢測結(jié)果帶來的影響；⑤假陽性：排除樣品與陰性抗體之間是否存在非特異性結(jié)合，確定IMBS實驗所設(shè)定的步驟、參數(shù)是否有假陽性結(jié)果存在。

宿主細(xì)胞蛋白（HCP）作為生物制品中來源于細(xì)胞基質(zhì)的殘留雜質(zhì)，具有明顯的異質(zhì)性特征。其復(fù)雜性體現(xiàn)在三個方面：①理化特性差異：HCP涵蓋胞內(nèi)及分泌蛋白，涉及關(guān)鍵生理功能，具有涵蓋區(qū)間大的等電點（pI 3-11）、分子量范圍（5-250kDa）及疏水性；②上游工藝影響：不同發(fā)酵工藝（如細(xì)胞株、培養(yǎng)條件）誘導(dǎo)獨特的翻譯后修飾（PTM），導(dǎo)致HCP總量與生化復(fù)雜性增加；③下游工藝與產(chǎn)物特性干擾：抗體、細(xì)胞因子等重組蛋白或病毒類藥物的純化工藝會選擇性殘留特定HCP，且產(chǎn)物形式（如大腸桿菌的包涵體/可溶性表達(dá)）直接影響HCP殘留譜。針對特定生產(chǎn)工藝開發(fā)定制化檢測方案是準(zhǔn)確監(jiān)控宿主細(xì)胞蛋白殘留的關(guān)鍵。

目前通過Vero細(xì)胞培養(yǎng)的病毒有狂犬病病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等，種類繁多，工藝也各有千秋。湖州申科生物Vero細(xì)胞裂解型HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法）針對工藝過程中Vero細(xì)胞裂解后產(chǎn)生的大量不同種類的HCPs，可定量檢測使用Vero細(xì)胞系生產(chǎn)并通過細(xì)胞裂解工藝收獲的生物制品中宿主細(xì)胞蛋白的殘留檢測，抗體與校準(zhǔn)品可覆蓋近3000種蛋白。試劑盒操作簡便，提高實驗人員的時間利用率。試劑盒抗體覆蓋率為65.1%-85.1%（IMBS-2D）和76.9%(IMBS-MS，Unique Peptide≥2）。試劑盒嚴(yán)格遵循ISO13485質(zhì)量體系進行生產(chǎn)，并按照法規(guī)要求進行了性能驗證，各項性能滿足Vero宿主細(xì)胞蛋白檢測需求。