完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據(jù)各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。實驗室是科學的搖籃,是科學研究的基地,科技發(fā)展的源泉,對科技發(fā)展起著非常重要的作用。PCR實驗室規(guī)范的操作:(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作;(2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。嚴格規(guī)范管理要求(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置的通道和進出整個實驗區(qū)的門;(2)在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;(3)盡量減少在實驗區(qū)內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。(4)擴增產物分析區(qū)是較主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉。PCR技術不僅可用于基礎研究,還適用于日常的臨床診斷、法醫(yī)學調查和農業(yè)生物技術研究。力康實時定量PCR儀銷售電話
實驗室基礎設施設計:包括實驗室基礎裝修、實驗室凈化工程、實驗室供排水工程、實驗室電路系統(tǒng)。1)實驗室基礎裝修需要潔凈天花、地板、隔斷,合理設置緩存間及配置凈化門、觀察窗、傳遞窗等。2)實驗室凈化工程實驗室應配備單獨送排風設施,試劑配置區(qū)、核酸提取區(qū)和擴增分析區(qū)應配備凈化系統(tǒng)。3)實驗室供排水工程包括非手動水龍頭、不銹鋼或PP水池和緊急淋浴器及供排水管線管路。4)實驗室電路系統(tǒng):根據(jù)儀器的功率配置合適的功率,特別注意高壓滅菌鍋的功率,注意實驗室用電安全。5)配備適用的應急器材,如應急照明設備、消防器材、意外事故處理器材等。實驗室儀器及設備:1)更衣室儀器及設備:更衣柜或掛衣架、鞋柜以及消毒器和烘干器。2)配液室儀器及設備:佰倫超凈工作臺、冰箱、小型離心機、旋渦振蕩器、微量移液器等。3)樣品處理室儀器及設備:離心機、組織研磨機、Ⅱ級生物安全柜、恒溫水浴鍋、冰柜等、可移動紫外消毒器。4)核酸提取室儀器及設備:核酸提取儀、Ⅱ級生物安全柜、恒溫水浴鍋、小型離心機、微量移液器、可移動紫外消毒器等。5)擴增分析區(qū)儀器及設備:熒光定量PCR儀、電腦、打印機、不間斷電源、可移動紫外消毒器等。力康實時定量PCR儀廠家直供PCR實驗室分為四個單獨工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū),標本制備區(qū),擴增反應混合物配置和擴增區(qū),擴增產物分析區(qū).
PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區(qū)標本制備區(qū)擴增區(qū)擴增產物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域。風速流向不得混亂。為了保證房間內的壓差和避免污染,應在空調面板處寫清楚送風機和排風機的開啟順序和關閉順序,先后順序不得混亂??諝鉂崈艏墑e不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5帕,潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差應大于10帕,應配備監(jiān)測靜壓差的設備,并定期監(jiān)控。一般情況下,試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染;可以通過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果。核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。理想情況下,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內。PCR實驗室進風由原有中央空調控制的要求將中央空調風口安裝到指定定點。
力康GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)性能特點:高清晰超大7寸液晶顯示屏-可選鍍金/鍍銀模塊,提高熱傳導效率,使實驗更高效;方便靈活的模塊更換裝置,輕松更換模塊;熱蓋旋鈕無級可調,適用各型號試管;樣品座工作區(qū)域全密閉設計,可確保低溫保存干燥清潔;可任意角度定位熱蓋;具備斷電記憶功能;環(huán)境溫度自動讀取,自動修正溫控誤差;支持用戶實驗預約設定,鬧鐘提醒功能;支持程序搜索功能,支持常用程序優(yōu)先選擇功能;支持多重嵌套循環(huán);支持梯度PCR、TouchdownPCR、LongPCR設定;可外接移動硬盤和鼠標,支持觸摸和鼠標操作;可實現(xiàn)遠程故障判斷;具有TM值計算功能,可更好地幫助用戶進行引物設計;可單獨配備PC機操作軟件,PC機與主機可分別各自控制,并實現(xiàn)一機多控。熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。
1.一般性原則(1)長度:一般引物互補區(qū)的長度為16-25bp,引物互補區(qū)的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之間,但有時受模板限制,無法理想化。但在有幾種選擇時,可以把G十c含量接近50%作為參數(shù)之一(3)堿基分布的隨機性:應避免連續(xù)出現(xiàn)4個以上的單一堿基。尤其是不應在其3’端出現(xiàn)超過3個的連續(xù)G或C,否則會使引物在G十C富集序列區(qū)錯誤引發(fā)。(4)引物自身:不能含有很長的牢固的自身互補序列,尤其是引物3‘端回折形成的發(fā)夾不要一般超過3堿基,否則會影響引物與模板的結合(5)引物之間:兩個引物之間不應有很長的牢固的互補或同源堿基,尤應避免3’端的互補重疊。2.具體原則①引物長度;特異性一般通過引物長度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設置在近于引物Tm值(引物/模板雙鏈體的解鏈溫度)幾度的范圍內,18到24個堿基的寡核苷酸鏈是有很好的序列特異性的。引物越長,擴增退火時被引發(fā)的模板越少。為優(yōu)化PCR反應,使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物,可獲得好的效率和特異性。總的來說,好在特異性允許的范圍內尋求安全性。每增加一個核苷酸,引物特異性提高4倍;這樣,大多數(shù)應用的短引物長度為18個核苷酸。 PCR可檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。力康核酸定量PCR儀價格比較
聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定DNA的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制.力康實時定量PCR儀銷售電話
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