轉(zhuǎn)基因小鼠對黑色素瘤發(fā)生的分子途徑的理解有重要意義。此外，轉(zhuǎn)基因小鼠是可靠且可重現(xiàn)的模型，用來評估受損基因?qū)谏亓錾飳W(xué)的影響。應(yīng)用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變在黑色素瘤的發(fā)生和發(fā)展的重要性及藥物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，為膠原原纖維形成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。黑色素瘤中Lumican表達(dá)降低與浸潤相關(guān)。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，建立Lum－/－轉(zhuǎn)基因小鼠。該模型可提供與發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制及可見變的進(jìn)展，以及確定負(fù)責(zé)的黑色素瘤進(jìn)展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠方法：有研究者使用突變的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K構(gòu)建體，并注射到卵母細(xì)胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K轉(zhuǎn)基因小鼠。3BrafV600E轉(zhuǎn)基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術(shù)從內(nèi)源性Braf基因中誘導(dǎo)BrafV600E表達(dá)，建立BrafV600E轉(zhuǎn)基因黑色素瘤小鼠模型。總結(jié)目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于實(shí)驗(yàn)動物與人類基因組、基因調(diào)控、細(xì)胞類型、結(jié)構(gòu)與組成等方面是有一定差別。因此，外科結(jié)扎膽總管并使膽總管完全阻塞已成為引起嚙齒動物梗阻性膽汁淤積性損傷的常用模型。湖南小鼠動物模型

本實(shí)用新型屬于動物實(shí)驗(yàn)設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)。背景技術(shù)：高原環(huán)境模擬系統(tǒng)可以在非高原地區(qū)“制造”出不同海拔高度和氣候條件，模擬各種高原缺氧環(huán)境，使實(shí)驗(yàn)動物在一定時(shí)間內(nèi)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求達(dá)到預(yù)期的高原反應(yīng)癥狀，使實(shí)驗(yàn)動物表現(xiàn)出高原性疾病，為高原疾病研究人員提供高原疾病模型動物，便于研究或預(yù)防高原性疾病的藥物。現(xiàn)有的環(huán)境模擬系統(tǒng)可以模擬實(shí)現(xiàn)高原光照和低氧環(huán)境，但模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動物種類單一。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本實(shí)用新型的目的在于：提供一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，解決現(xiàn)有高原環(huán)境模擬系統(tǒng)中存在的模型成功率較低、動物死亡率較高、造模動物種類單一的問題。本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案如下：一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，包括功能設(shè)備集成底座和設(shè)置在功能設(shè)備集成底座上的飼養(yǎng)倉，所述飼養(yǎng)倉具有無極調(diào)控微負(fù)壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置、高原溫度環(huán)境模擬裝置、高原濕度環(huán)境模擬裝置、動物行為學(xué)遠(yuǎn)程觀察單元，所述飼養(yǎng)倉內(nèi)設(shè)置有若干代謝籠，飼養(yǎng)倉前后箱體上設(shè)置有觀察窗和若干操作窗。江蘇模式動物模型服務(wù)高脂飼料致高脂血癥大鼠模型。

省心省時(shí)一些基因編輯鼠模型表型不易發(fā)現(xiàn)，需要結(jié)合外科手術(shù)造模、物理刺激或藥物誘導(dǎo)才能發(fā)現(xiàn)表型。專業(yè)的手術(shù)模型團(tuán)隊(duì)結(jié)合成熟穩(wěn)定的基因修飾鼠平臺和飼養(yǎng)繁育平臺，賽業(yè)生物可為您提供一站式“基因編輯鼠模型制備——種群擴(kuò)繁——手術(shù)造模——表型驗(yàn)證”服務(wù)，讓您省心省時(shí)。3.專業(yè)的技術(shù)支持賽業(yè)生物專業(yè)的小動物外科手術(shù)團(tuán)隊(duì)熟練掌握多種模型的制備，具備建立復(fù)雜及復(fù)合手術(shù)疾病模型的能力，可能夠根據(jù)您的需求，制定合理的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，同時(shí)提供及時(shí)的項(xiàng)目匯報(bào)與售后服務(wù)，讓您省事省心。，確保動物福利與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國際接軌賽業(yè)模式動物中心通過ISO9001:2015和AAALAC雙認(rèn)證，ISO9001:2015認(rèn)證確保向廣大學(xué)者提供的所有產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)符合國際標(biāo)準(zhǔn)，AAALAC認(rèn)證表明了賽業(yè)生物尊重動物福利和倫理，重視生物安全的負(fù)責(zé)態(tài)度。適用動物品種：大鼠、小鼠。手術(shù)疾病模型團(tuán)隊(duì)首席科學(xué)家簡介張榮利博士張榮利博士有二十多年小鼠手術(shù)疾病模型制備經(jīng)驗(yàn)，畢業(yè)后先后在中國中醫(yī)科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)及國際學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)任職，2011年起在美國CaseWesternReserveUniversity工作，任ResearchScientist并擔(dān)任心血管生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任，負(fù)責(zé)基因工程動物的疾病表型發(fā)現(xiàn)與新藥臨床前研究。

所述外顯子序列為第3外顯子序列。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，利用cre-loxp基因敲除技術(shù)敲除gm20541基因上的第3外顯子序列。上述敲除策略是采用cre-loxp敲除技術(shù)敲除gm20541基因。但在其他的實(shí)施例中，實(shí)現(xiàn)基因敲除的技術(shù)手段有很多，例如crispr/cas9技術(shù)、人工核酸酶介導(dǎo)的鋅指核酸酶技術(shù)(zinc-fingernucleases，zfn)、轉(zhuǎn)錄因子樣效應(yīng)物核酸酶技術(shù)(transceriptionactivator-likeeffectornucleases,talen)等。因此，在其他的實(shí)施例中采用crispr/cas9技術(shù)或其他的技術(shù)手段敲除gm20541基因，也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述目標(biāo)動物為哺乳動物。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述哺乳動物選自小鼠、大鼠、狗、豬、猴以及猿中的任意一種。需要說明是，本發(fā)明所述的目標(biāo)動物并不限于上述的動物，其他類型的哺乳動物也是可行，無論選用何種動物，只要是具有g(shù)m20541基因或其同源基因的動物，均可作為本發(fā)明所述構(gòu)建方法中的目標(biāo)動物，在其前體細(xì)胞中敲除gm20541基因，使其表現(xiàn)出視網(wǎng)膜色素變性性疾病特征，作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，這也是屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。第二方面。面神經(jīng)受損而致面部表情肌群的運(yùn)動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。

e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的暗適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；scotopicamplitude：暗光測定峰值；flashintensity：閃光強(qiáng)度；a-wave：a波；b-wave：b波。圖6：光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(erg)檢測結(jié)果；圖中：a-b：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；c：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖軌跡圖；d：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖a波統(tǒng)計(jì)；e：不同光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖b波統(tǒng)計(jì)；f：20cd·s/m2光強(qiáng)下gm20541基因敲除小鼠的光適應(yīng)閃爍(flicker)視網(wǎng)膜電圖統(tǒng)計(jì)。sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖7：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜切片免疫組化染色結(jié)果；小鼠年齡：4個(gè)月；os：outer-segment(外節(jié))；is：inner-segment(內(nèi)節(jié))；onl：outernuclearlayer(外核層)；inl：innernuclearlayer(內(nèi)核層)；圖中：a：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠視網(wǎng)膜石蠟切片的h&e染色結(jié)果，外核層及內(nèi)核層均變薄；b：對不同部位的gm20541敲除鼠視網(wǎng)膜外核層厚度統(tǒng)計(jì)。圖8：視網(wǎng)膜前體細(xì)胞特異敲除gm20541基因小鼠ihc染色結(jié)果。故大腦中動脈阻塞(MCAO)模型被用于局灶性腦缺血的研究。上海乳鼠動物模型飼養(yǎng)

大腦中動脈(MCA)為臨床上發(fā)生腦缺血損傷常見的部位之一。湖南小鼠動物模型

微波爐中融化后制成1％的瓊脂糖膠。取10μlpcr產(chǎn)物于加樣孔中，120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統(tǒng)成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結(jié)果，wt表示野生型對照，條帶大小為223bp；het表示雜合子，有兩個(gè)條帶223bp和358bp；sixko表示純合子，條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3－cre鑒定結(jié)果。six3－cre大小為200bp。根據(jù)圖4中a的結(jié)果，顯示所采用的鑒定方法可對新生小鼠的基因型進(jìn)行有效鑒定。其中，gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網(wǎng)膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子)，并進(jìn)行相關(guān)表型的驗(yàn)證。(5)rt-pcr實(shí)驗(yàn)分析six3-cre敲除小鼠視網(wǎng)膜中基因敲除效率驗(yàn)證，方法如下：(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網(wǎng)膜組織，置于，加入1mltrizol提取液，室溫20分鐘；(b)加入200μl氯仿，充分混勻，室溫靜置10分鐘；(c)將樣品置于4度離心機(jī)，10000轉(zhuǎn)離心15分鐘；(d)小心吸取上清液，加入等體積異丙醇，充分混勻，10000轉(zhuǎn)離心沉淀rna；(e)75％乙醇清洗析出的總rna，離心再次沉淀，然后晾干加入depc水溶解；(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。湖南小鼠動物模型